百螢課堂之-多重Caspase活性

半胱氨酸蛋白酶，半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶或半胱氨酸依賴性天冬氨酸定向蛋白酶，是一個半胱氨酸蛋白酶家族，在細(xì)胞凋亡(細(xì)胞程序性死亡) ，壞死和炎癥中發(fā)揮重要作用。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶在細(xì)胞發(fā)育和成年生命的大多數(shù)其他階段是必不可少的，并且因其在細(xì)胞中的作用而被稱為“劊子手”蛋白質(zhì)。一些半胱天冬酶在免yi系統(tǒng)中也是淋ba細(xì)胞成熟所必需的。細(xì)胞凋亡的失敗是腫瘤發(fā)生和自身免yi性**的主要原因之一。也有報道說，不必要的細(xì)胞凋亡發(fā)生在缺血或阿爾茨海默病。這些新發(fā)現(xiàn)激發(fā)了人們對半胱天冬酶作為潛在治liao靶點(diǎn)的興趣，因?yàn)樗鼈兪窃?0世紀(jì)90年代中期發(fā)現(xiàn)的。

Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡測定試劑盒的目的是通過測量 Caspase 3活性來監(jiān)測細(xì)胞凋亡。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3被廣泛認(rèn)為是細(xì)胞凋亡的可靠指標(biāo)，因?yàn)榘腚装彼崽於彼岬鞍酌?-3(CPP32/載脂蛋白酶)的激活對于細(xì)胞凋亡的啟動是重要的。半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3對氨基酸測序天冬氨酸-谷氨酸-谷氨酸-天冬氨酸具有底物選擇性。試劑盒中使用 Z-devD-ProRedTM 作為半胱天冬酶 -3活性的熒光指示劑。通過半胱天冬酶3切割 ProRedTM devD 阻斷肽殘基產(chǎn)生強(qiáng)烈的紅色熒光 ProRedTM，其在約620nm 處熒光測定，在約530nm 處激發(fā)。

Caspase 3/7活性細(xì)胞凋亡檢測試劑盒提供了一個優(yōu)化的檢測方案的所有必需成分。該檢測方法穩(wěn)定可靠，可以很容易地適用于各種熒光平臺的高通量檢測，如微板檢測。使用96孔格式的每孔100μL 試劑，該試劑盒提供足夠的試劑進(jìn)行100次測定。使用384孔格式的每孔25μL 試劑，該試劑盒提供足夠的試劑來執(zhí)行400次測定。

Cell Meter Caspase3/7活性檢測試劑盒主要特點(diǎn)：

1. 多色功能，可以使用不同顏色的熒光指示劑同時檢測不同類型的半胱氨酸活化，如半胱氨酸8、9和10；

2. 穩(wěn)定性好，只需將試劑和細(xì)胞混合后，即可直接讀取結(jié)果，無需細(xì)胞裂解或透化細(xì)胞膜；

3. 方便性高，與常用的濾光片組合兼容。

圖1.檢測 Jurkat 細(xì)胞中 caspase 3/7的活性。在同天以200,000個細(xì)胞/孔/90μL 在 Costar 黑色壁/透明底部96孔板中接種 Jurkat 細(xì)胞。用或不用1μM 星形孢素處理細(xì)胞5小時。加入半胱天冬酶3/7測定溶液(100μL/孔) ，室溫孵育1小時。熒光強(qiáng)度在 Ex/Em = 540/620nm 處測定。

圖2.AMC、 R110和 ProRedTM 在 pH 為7.0的緩沖液中的熒光光譜。AMC，R110和 ProRedTM 半胱天冬酶底物非常適合于多路復(fù)用半胱天冬酶活性。

表1.用于測量Caspase3.7.8.9活性的檢測試劑盒