百螢教您選擇正確的ROS探針，正確的選擇讓實(shí)驗(yàn)不再迷茫。活性氧（ROS）是化學(xué)反應(yīng)性的含氧化學(xué)物質(zhì)，其作為細(xì)胞代謝的副產(chǎn)物而產(chǎn)生。 在動(dòng)物細(xì)胞中，ROS的產(chǎn)生通常發(fā)生在線(xiàn)粒體中。 在植物細(xì)胞中，ROS也可以在葉綠體中產(chǎn)生。 *近，已顯示ROS在過(guò)氧化物酶體和各種細(xì)胞類(lèi)型的質(zhì)膜氧化酶中產(chǎn)生。
當(dāng)過(guò)量產(chǎn)生時(shí)，ROS一直被認(rèn)為會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞大分子如DNA，脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的損傷。 從整體上講，這是由細(xì)胞的氧化應(yīng)激狀態(tài)表示的。 這種應(yīng)激狀態(tài)與細(xì)胞過(guò)程如細(xì)胞凋亡有關(guān)，而且在宏觀(guān)上更像是在許多人類(lèi)**的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮作用。
由于其具有破壞性的影響，細(xì)胞有幾個(gè)精心調(diào)節(jié)的系統(tǒng)來(lái)管理過(guò)量的ROS。 *充分研究的系統(tǒng)是谷胱甘肽 - 抗壞血酸循環(huán)，其使用NADH和NADPH作為電子供體將H2O2**為H2O。 其他系統(tǒng)包括酶，例如超氧化物歧化酶，其催化超氧陰離子（O 2- ）歧化成O 2或H 2 O 2，和過(guò)氧化氫酶，其催化H 2 O 2分解成H 2 O和O 2。
ROS對(duì)細(xì)胞的利與弊導(dǎo)致它們?cè)缫驯粡V泛的研究了，但是*近研究已經(jīng)研究了ROS在細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)中的作用。 在控制量方面，ROS已被證明可調(diào)節(jié)基因活化。 然而，出現(xiàn)這種情況的具體機(jī)制仍有爭(zhēng)議。ROS可能與特殊受體結(jié)合，這些受體啟動(dòng)信號(hào)級(jí)聯(lián)，導(dǎo)致基因調(diào)控。 ROS也可能通過(guò)調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)磷酸化直接修飾這種信號(hào)級(jí)聯(lián)中的蛋白質(zhì)。
既然ROS對(duì)細(xì)胞作用如此之大且類(lèi)型繁多，那么如何才能正確的選擇探針對(duì)ROS進(jìn)行檢測(cè)呢？
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檢測(cè)目標(biāo)
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作用目標(biāo)
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探針
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貨號(hào)
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原理
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過(guò)氧化氫（H2O2）
許多酶促ROS**途徑的產(chǎn)物。 *充分研究的是超氧化物歧化酶活性，其催化超氧陰離子還原為過(guò)氧化氫。
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活細(xì)胞
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DCFH-DA
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15204
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探針進(jìn)入細(xì)胞，其中酯酶裂解雙乙酸酯基團(tuán)。 然后DCFH被過(guò)氧化氫氧化成DCF并在激發(fā)時(shí)發(fā)出綠色熒光。
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二氫羅丹明123
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15206/15207
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探針被動(dòng)地滲透細(xì)胞膜。 通過(guò)過(guò)氧化氫氧化產(chǎn)生羅丹明123，其在激發(fā)時(shí)發(fā)出藍(lán)色熒光。
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OxiVision? Blue
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11504/11505
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探針滲透細(xì)胞并被細(xì)胞內(nèi)過(guò)氧化氫氧化，激發(fā)時(shí)產(chǎn)生熒光
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OxiVision? Green
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11503/11506
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細(xì)胞提取物
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Amplite?熒光過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒（紅色）
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11501
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過(guò)氧化氫依賴(lài)氧化ADHP（同義詞：10-乙?；?3,7-二羥基吩惡嗪，Amplex®Red）通過(guò)辣根過(guò)氧化物酶（HRP）將ADHP轉(zhuǎn)化為試鹵靈。 可以使用比色法或熒光法檢測(cè)試鹵靈。
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Amplite?比色過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒
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11500
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Amplex?紅色過(guò)氧化氫/過(guò)氧化物酶檢測(cè)試劑盒
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辣根過(guò)氧化物酶（HRP）對(duì)過(guò)氧化氫IR的過(guò)氧化氫依賴(lài)性氧化產(chǎn)生活化的探針。 激發(fā)會(huì)發(fā)出近紅外熒光信號(hào)
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Amplite?熒光過(guò)氧化氫檢測(cè)試劑盒（紅外光）
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11502
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檢測(cè)目標(biāo)
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作用目標(biāo)
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探針
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貨號(hào)
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原理
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超氧陰離子（O2-）
有氧代謝的副產(chǎn)物，如線(xiàn)粒體呼吸（特別是復(fù)合物I和復(fù)合物III）
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活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
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lucigenin（光澤精）
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21259
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通過(guò)轉(zhuǎn)化為光澤精陽(yáng)離子基團(tuán)激活光澤精。 光澤精陽(yáng)離子自由基與超氧陰離子反應(yīng)生成二氧雜環(huán)丁烷中間體，其分解為N-甲基吖啶酮。 N-甲基吖啶酮中的高能電子降低能量狀態(tài)，導(dǎo)致發(fā)光。
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Coelenterazine（腔腸素）
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21150
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超氧陰離子的氧化導(dǎo)致激發(fā)的電子態(tài)。 在衰變到基態(tài)電子配置時(shí)，光子作為發(fā)光釋放。
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Luminol（魯米諾）
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11050
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超氧化物依賴(lài)性酶催化魯米諾的氧化導(dǎo)致發(fā)光。
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Hydroethidine（二氫乙錠）
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15200
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探針被動(dòng)地滲透完整細(xì)胞并定位于線(xiàn)粒體中。 通過(guò)超氧化物氧化激活探針。 活化的探針與DNA嵌入，并在激發(fā)后發(fā)熒光。 DNA結(jié)合是強(qiáng)熒光信號(hào)所必需的。 對(duì)于氫化乙啶，活化的探針是乙錠（即與DNA染色溴化乙錠相同的活性物質(zhì)）
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MitoSox? Red
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/
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MitoROS? 580
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16052/22970/22971
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MitoROS? 520
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16060
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探針容易通過(guò)完整的細(xì)胞膜，然后定位在線(xiàn)粒體中。 然后通過(guò)超氧化物氧化。 激發(fā)后，它會(huì)釋放出綠色熒光
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檢測(cè)目標(biāo)
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作用目標(biāo)
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探針
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貨號(hào)
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原理
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羥基（?OH）
當(dāng)超氧陰離子與過(guò)渡金屬反應(yīng)時(shí)可以產(chǎn)生。 極度反應(yīng)。 可以與DNA骨架上的氫反應(yīng)，導(dǎo)致鏈斷裂。
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活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
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MitoROS? OH580
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16055
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探針能夠自由地進(jìn)入活細(xì)胞，其中活細(xì)胞被游離羥基特異性氧化。 激發(fā)后，氧化的探針發(fā)出紅色熒光。
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總ROS
包括過(guò)氧化氫，超氧陰離子，羥基自由基，單線(xiàn)態(tài)氧，一氧化氮，過(guò)氧化丁基和次氯酸
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活細(xì)胞/細(xì)胞提取物
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ROS? Brite 570
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16000/22902
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探針被動(dòng)地滲透完整的細(xì)胞膜。 一旦進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，探針就被細(xì)胞內(nèi)的ROS氧化。 探針也可以在溶液中被ROS氧化，用于細(xì)胞提取物測(cè)定。 激發(fā)后，探針發(fā)出熒光信號(hào)。
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ROS? Brite 670
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16002/22901
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ROS? Brite 700
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16004/22903
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Amplite? ROS Green
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22900
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